【分　 类】 医药卫生
【关 键 词】 佐剂性关节炎；免疫球蛋白；相关性
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正文：

1.6.4 免疫荧光检测大鼠踝关节滑膜的BAFF、IgG轻链κ、λ。
3%H2O2甲醇溶液抑制内源性过氧化物酶。1.5%正常羊血清湿盒37e，30min后滴加一抗，稀释度为1:100，湿盒4e过夜。滴加荧光素标记的第二抗体，1:100稀释，温盒37e，30min。在荧光显微镜下观察显色反应。该实验完成于安徽省立医院病理科。
1.7 统计学处理
应用SPSS19. 0软件两组两独立样本t检验、相关性分析。
 
2 结  果
2.1 两组大鼠一般情况变化：
NC组大鼠体毛顺滑尚有光泽，饮食如常，反应较灵敏，四肢关节无红、肿、溃烂等情况，二便正常。MC组大鼠四肢关节多红肿、跖趾溃烂，多有体重明显下降，皮毛暗淡无光、稀疏，食纳减少，活动量下降。
2.2 两组大鼠体重、足跖肿胀度、关节炎指数的比较：
致炎前两组大鼠的体重无显著性差异； 致炎后14天MC组大鼠体重出现下降，于致炎42天体重下降至最高峰；致炎18天足跖肿胀度达最高峰，后逐渐下降；致炎12天MC组大鼠左后足趾、部分双前足趾开始出现红肿，致炎26天达高峰，后逐渐下降。结果见表1。
表1 两组大鼠体重、足跖肿胀度和关节炎指数的比较(,n=12)
组别
体重
E
AI

致炎0天
致炎14天
致炎42天
致炎18天
致炎42天
致炎14天
致炎42天

NC
183.75±18.96
239.54±18.22
352.85±30.93
30.65±18.72
36.80±16.74
0
0

MC
188.33±19.92
228.63±19.8
288.57±24.61*
60.43±26.31**
72.6±30.32*
5.25±1.91**
6.5±2.77**

注:与正常组比较，*P<0. 05，**P<0. 01
 
2.3 两组大鼠踝关节HE染色：
NC组大鼠踝关节（图 1）：关节结构完整无损，胫骨远端骨小梁无吸收，关节软骨面光滑平整，关节软骨层较厚，关节腔间隙清楚，滑膜组织未见充血水肿，滑膜细胞无增生，无血管翳形成，无炎性细胞浸润；
MC组大鼠踝关节（图2）：关节软骨及软骨下骨质出现广泛受累，部分关节软骨面被炎性细胞完全浸润，大范围的软骨表层组织的变性、坏死，关节软骨面剥脱，关节面凹凸不平。软骨下骨质亦被大量的炎性细胞充斥，正常结构严重破坏，骨髓组织大量纤维化。
                     
     图1  NC组（×200）                            图2   MC组（×200）
 
2.4 两组大鼠细胞因子及免疫球蛋白的比较：
与NC组比较，MC组IL-1β、TNF-α明显升高，IL-4、IL-10明显降低，MC组BAFF、IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2a明显升高，差异具有统计学意义（P<0.01）。（结果见表2、表3。）
 
表2 两组大鼠细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的比较(,n=8)
组别
细胞因子

IL-1β
TNF-α
IL-4
IL-10

NC
3.58±0.57
46.09±6.57
80.59±10.7
106.59±14.75

MC
7.34±2.29**
92.56±3.67**
32.09±7.45**
51.51±20.1**

注:与正常组比较，**P<0. 01
 
 
 
 
 
 
 
 
表3 两组大鼠免疫球蛋白BAFF、IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2a、IgG2a/ IgG1的比较（,n=8）
组别
免疫球蛋白

BAFF
IgG
IgA
IgM
IgG1
IgG2a
IgG2a/ IgG1

NC
529.28±268.77
0.27±0.05
0
0.32±0.23
152.52±7.10
40.17±3.83
0.27±0.03

MC
1216.20±259.74**
0.50±0.03**
0
0.09±0.02*
138.92±8.85*
50.64±3.95**
0.50±0.02**

注:与正常组比较，*P<0.05,**P<0. 01
 
2.5 两组大鼠滑膜BAFF及IgG轻链κ、λ的比较：
与NC组比较，MC组滑膜中BAFF明显升高IgG轻链κ、λ明显升高，κ/λ明显降低。差异具有统计学意义（P<0.01）。（结果见表4。）
 
表4 两组大鼠滑膜BAFF及IgG轻链κ、λ的比较（,n=5）
组别
BAFF及IgG轻链κ、λ

BAFF
κ
λ
κ/λ

NC
0.84±0.10
1.11±0.09
0.86±0.06
1.32±0.05

MC
0.99±0.10**
1.00±0.07*
1．01±0.11**
0.95±0.10**

注:与正常组比较，*P<0.05,**P<0. 01
 
2.6 AA大鼠免疫球蛋白相应指标及细胞因子的相关性分析：
IgG与E呈正相关； IgG1则与E、AI、IL-1呈正相关，与IL-4呈负相关；IgG2a与IL-10呈负相关；IgG2a/ IgG1则与E、IL-10呈负相关；κ与AI、IL-4呈负相关，与E、IL-10呈正相关；λ与IL-1呈负相关；κ/λ与与IL-10呈负相关；血清BAFF与TNF-α呈正相关；滑膜BAFF与E、AI、IL-1呈正相关（P<0.01或0.05）（结果见表5）。
表5 免疫球蛋白、IgG轻链κ、λ及细胞因子的相关性分析
 
IgG
IgM
IgG1
IgG2a
IgG2a/ IgG1
κ
λ
κ/λ
BAFF
BAFF滑膜

E
.310*
.003
.575**
-.170
-.439**
.351*
.291
-.187
-.010
.644**

AI
-.141
-.105
.545**
.040
-.003
-.382*
-.015
.167
.360
.389*

IL-1
.071
.247
.370*
-.270
-.026
.137
-.413**
-.088
-.111
.404*

TNF-α
.172
-.201
.045
-.032
-.294
-.296
.267
.192
.576**
.369

IL-4
-.299
-.107
-.620**
.114
.137
-.545**
-.259
.281
.358
-.373

IL-10
.103
.180
.001
-.528**
-.309*
.412**
-.184
-.429**
-.056
-.200

 
 
注: *P<0. 05，**P<0. 01
 
 
3 讨  论
 
RA最基本的病理改变之一为关节滑膜组织的炎症。目前类风湿关节炎的病因及发病机制仍不完全清楚，可能有一种或多种调节机制异常导致自身反应性 T 细胞活化增殖和 B 细胞释放大量自身抗体，不断对关节滑膜等组织攻击造成关节炎，致炎性细胞因子如TNF-α、IL-1异常增多进一步加速了 RA 病情的发展，免疫效应与免疫耐受机制的失衡如 Th1/Th2 平衡紊乱[]等是导致 RA 患者病情迁延的主要原因。
近年的研究表明 Th1 和 Th2 细胞互为调节细胞，通过分泌功能不同的细胞因子相互制约，其平衡维持着机体免疫系统的正常功能[]。Th1 和 Th2 细胞所致的不同优势免疫应答与疾病的发生、发展及预后密切相关［］。AA大鼠中细胞因子分泌失衡，使得Th1/Th2升高，免疫平衡紊乱和炎症介质的释放[]。抗体的产生受 Th1、Th2 细胞因子的调控，并与特异性抗体 IgG 亚类的表达水平相关。Th1 细胞因子刺激 IgG2a的产生，Th2 细胞因子促进 IgG1的合成[]。Th1/Th2细胞失衡是RA局部组织炎症的重要特征，也是RA肺病变病理生理过程形成的始动因素和维持因素。在RA中，Th1细胞通过释放TNF-A、巨噬细胞衍生性趋化因子(MDC)等多种细胞因子和趋化因子而促进了IgE的形成，嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞的聚集和活化[]，使得RA关节局部炎症反应加剧，炎症介质的过度分泌。相反，Th2细胞通过释放IL-4、IL-10等细胞因子而抑制Th1细胞增殖。在过敏性疾病中 Th2 免疫应答及其细胞因子占优势，即 Th1/Th2 平衡向 Th2 方向偏移，这类疾病属于 Th2 模式。完全弗氏佐剂（CFA）则可以加强诱导 Th1 型免疫应答，辅助 B 细胞产生 IgG2a。Th2 细胞因子主要介导 IgM 向 IgG1 的类别转换，Th1 细胞因子则主要介导 IgM 向 IgG2a 的类别转换。因此，检测血清特异性IgG1 和 IgG2a 水平可以间接反映 Th1/Th2 细胞因子分泌功能。本研究发现AA大鼠的IgG1较正常对照组明显下降，IgG2a明显上升，IgG2a/ IgG1明显上升，因此Th0向Th1的转换占主导地位，故可发现实验中AA大鼠的血清细胞因子IL-1β、TNF-α明显升高，IL-4、IL-10明显降低。

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