【分　 类】 医药卫生
【关 键 词】 佐剂性关节炎；免疫球蛋白；相关性
【来 　源】 互联网
【收　 录】 中文学术期刊网

正文：
摘要 
目的  观察佐剂关节炎（AA）大鼠滑膜中免疫球蛋白轻链κ、λ的表达及血清中IgG1、IgG2a的表达和细胞因子白细胞介素－1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子－α（TNF-α）、白细胞介素－4（IL-4）、白细胞介素－10（IL-10）的水平并进行相关性分析。方法  将24只雄性SD大鼠随机分为对照组（12只）和模型组（12只），模型组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0. 1 mL致炎，42d后处死两组大鼠，检测两组大鼠体质量、足趾肿胀度（E%）、关节炎指数（AI）及踝关节HE染色光镜变化；ELISA法检测大鼠血清IgG1、IgG2a、BAFF、IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的表达；免疫荧光法检测大鼠滑膜中免疫球蛋白轻链κ、λ及BAFF的表达。结果  与正常对照组相比，模型组大鼠体质量明显降低（P<0.05），E%、AI明显升高（P<0.05）；光镜下，模型组滑膜组织被大量炎细胞浸润；模型组大鼠的血清BAFF、IgG2a、IL-1β、TNF-α明显上升，IgG1、IL-4、IL-10明显下降；滑膜中BAFF、κ、λ均显著升高；其中IgG与E呈正相关； IgG1则与E、AI、IL-1呈正相关，与IL-4呈负相关；IgG2a与IL-10呈负相关；IgG2a/ IgG1则与E、IL-10呈负相关；κ与AI、IL-4呈负相关，与E、IL-10呈正相关；λ与IL-1呈负相关；κ/λ与与IL-10呈负相关；血清BAFF与TNF-α呈正相关；滑膜BAFF与E、AI、IL-1呈正相关（P<0.01或0.05）结论 AA大鼠的免疫球蛋白明显升高，体液免疫的紊乱导致滑膜炎症的发生发展。
关键词  佐剂性关节炎；免疫球蛋白；相关性
Abstract
Objective To evaluate the adjuvant arthritis (AA) synovium immunoglobulin light chain κ, λ and expression of serum IgG1, IgG2a and cytokine interleukin -1β (IL-1β), tumor necrosis factor - α (TNF-α), interleukin -4 (IL-4), interleukin -10 (IL-10) levels and correlation analysis. Methods A total of 24 male Sprague-Dawley(SD) rats were randomized into 2 groups:normal control (NC) and model control (MC)  goups(12 in each) .The MC group were intracutaneously injected in the right hind limb with 0.1ml of Freund's complete adjuvant(FCA), Twenty-eight days after administration ,the changes in swelling degree,AI,and HE of ankle; ELISA detect rat IgG1, IgG2a, BAFF, IL-1β, TNF-α, IL-4, IL-10 expression in serum; immunofluorescence assay synovium immunoglobulin light chain κ, λ and BAFF. Results Compared with NC, the MC rats’ weight were significantly lower (P <0.05), E%, AI was significantly higher (P <0.05); there are infiltration of inflammatory cells in MC rats’ synovial tissue by optical microscope; MC rats serum BAFF, IgG2a, IL-1β, TNF-α significantly increased, IgG1, IL-4, IL-10 significantly decreased; the synovial membrane BAFF, κ, λ were significantly elevated,which was a positive relevant with IgG and E%; IgG1 then was positively correlated with E%, AI, IL-1,IL-4 was negatively correlated; IgG2a and IL-10 were negatively correlated; IgG2a / IgG1 then and E, IL-10 was negatively correlated; κ and AI, IL-4 was negatively correlated with E%, IL-10 was positively correlated; λ and IL-1 was negatively correlated; κ / λ and the IL-10 were negatively correlated; serum BAFF and TNF-α were positively correlated; synovial membrane BAFF and E%, AI, IL-1 was positively correlated (P <0.01 or 0.05) Conclusion AA rats immunoglobulin was significantly elevated, humoral immune disorders lead to the development of synovial inflammation.
 
Keywords adjuvant arthritis; immunoglobulin; correlation
 
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的风湿性疾病,以慢性对称性外周关节炎为主的慢性全身性自身免疫性疾病。在遗传、感染、激素等多种因素共同作用下本病多出现机体的免疫应答异常,多有血浆免疫球蛋白的升高以及体液免疫的异常[]。本文以弗氏完全佐剂(Freund.s complete adjuvan，CFA)注射作为免疫刺激，观察佐剂关节炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠体质量、关节炎指数的变化；血浆免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2a的变化、IgG轻链κ、λ在滑膜中的变化以及B淋巴细胞刺激因子BAFF的变化和血清细胞因子白细胞介素－1β（interleukin－1β，IL-1β）、肿瘤坏死因子－α（tumor necrosis factor－α，TNF-α)、白细胞介素－4（interleukin－4，IL-4）、白细胞介素－10（interleukin－10，IL-10）的表达并进行相关性分析[]。现将研究结果报道如下。
1、材料与方法
1.1 实验动物
清洁级雄性SD大鼠24只，鼠龄5~6月，体重量(170±20)g，由安徽省实验动物中心提供，许可证号： SCXK(皖)2011-002。清洁级标准饲养。
1.2 药品及试剂
弗氏完全佐剂(CFA)：由美国SIGMA公司出品(批号: 1001541106)；ELISA检测血浆IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10、BAFF、IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2a试剂盒购自南京建成生物工程有限公司。免疫荧光检测滑膜中BAFF、IgG轻链κ、λ，抗体购于北京博奥森公司（批号：130586W，990398W，1311108W）。
1.3 仪器与设备
足趾容积测量仪：北京吉安得尔科技有限公司，型号：YLS-7B；组织石蜡包埋机：德国徕卡（LEICA）公司，型号：A130395；石蜡切片机：德国LEICA公司，型号：RM2245；组织脱水机：德国LEICA公司，型号：ASP300S；漂片机：美国伯明斯顿（Bloomington）公司，型号：MP-220；烘片机：德国LEICA公司，型号：HI1220；染色机: 德国赛利（SLEE）公司，型号：MAS。显微镜：日本奥林巴斯 （OLYMPUS）公司，型号：BX53；酶标仪：杜雷公司，型号：RT-6000。 
1.4 模型复制、给药
将24只雄性SD大鼠适应性喂养1周后，随机对照表随机分组为正常组（NC组）12只、模型组（MC组）12只，向MC组每只大鼠左足跖皮内注射CFA 0. 1 mL致炎，复制成佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型[]。
1.5 样品采集
致炎42天后用10%水合氯醛(0. 35mL/100 g)腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，留取血液标本一部分离心取血清ELISA检测IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10、BAFF、IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2a；常规处死NC组（12只）大鼠、MC组（8只）大鼠，每组取5只大鼠右后足踝关节置10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋、切片光镜检测。
1.6 观察指标
1.6.1 足跖肿胀度（E%）
分别在造模前1天、给药前1天、给药后每3天测量各组大鼠的右后足跖的容积，计算各组大鼠足跖肿胀度。肿胀度E(% )=(Vt - Vn) /Vn*100% (Vn、Vt分别代表用致炎剂前后足跖容积值)。
1.6.2 关节炎指数(AI)的计算
致炎后第14天开始观察并记录全身关节病变程度，每3天1次。全身病变按5级评分法评价，根据未注射佐剂的其余3只肢体的病变程度累积积分，计算出AI[]。0分：无红肿；1分：小趾关节红肿；2分：趾关节和足跖肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；4分：包括踝关节在内的全部足爪肿胀。把各个关节的积分累计起来，即为每只大鼠的AI。
1.6.3 ELISA检测IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10、BAFF、IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2a
严格按照ELISA试剂盒说明书操作测定IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的含量。本实验完成于安徽中医药大学第一附属医院实验中心。
1.6.4 光镜观察大鼠踝关节病理情况
用4%多聚甲醛固定24h后，10%乙二胺四乙酸（EDTA）脱钙5周，每4~5天换液一次；脱钙完全后，石蜡包埋（浸软蜡50~52ºC、浸硬蜡58~60ºC），切片（修、切、展、贴、烤片），HE染色。HE染色步骤：石蜡切片入二甲苯（30 min，×2次）→1,2二甲苯（10 min）→100%酒精（20 min）→90%酒精（10 min）→80%酒精（10 min）→70%酒精（10 min）→双蒸水洗2次→Harris苏木精（10 min）→双蒸水洗3次→0.5%盐酸酒精分色（0.5 min）→双蒸水洗3次→1%氨水蓝化（0.5 min）→自来水洗（2 h）→70%酒精（10 min）→80%酒精（10 min）→复染伊红（1 min）→90%酒精（10s）→95%酒精I（10 min）→95%酒精（10 min）→100%酒精（15 min）→100%酒精（15 min）→1,2二甲苯（10 min）→二甲苯（15 min，×2次）→中性树胶封片。显微镜观察大鼠关节滑膜及软骨组织病理形态变化。该实验完成于安徽省立医院病理科。

 1/3    1 2 3 下一页 尾页