【分　 类】 医药卫生
【关 键 词】 多器官功能障碍综合征 大承气汤 平滑肌 胃肠动力
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正文：
摘    要
目的：检测大承气汤对多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS）大鼠小肠平滑肌Bcl-2、Bax和NF-κB表达的变化，探讨大承气汤促进胃肠动力恢复的机制。方法：Wistar大鼠100只，随机分为对照组20只、MODS组40只和大承气汤组40只。对照组大鼠腹腔注射1ml生理盐水，MODS组和大承气汤组大鼠腹腔注射1ml E.coli.混悬液，建立细菌性腹膜炎致MODS大鼠模型。大承气汤组于造模前2日给予大承气汤灌胃，每次1ml/100g，2次/日。造模24小时后取存活大鼠的上段小肠，采用免疫组化染色法检测小肠平滑肌Bcl-2、Bax和NF-κB的表达情况。结果：与对照组组比较，MODS组大鼠小肠平滑肌Bcl-2表达明显减少(P＜0.05)，而Bax和NF-κB表达明显增多(P＜0.05)。与MODS组比较，大承气汤组大鼠小肠平滑肌Bax、NF-κB表达明显减少(P＜0.05)，Bcl-2表达明显增多(P＜0.05)。结论：大承气汤可能通过抑制MODS大鼠小肠平滑肌线粒体的损伤，促进胃肠动力的恢复。
关键词：多器官功能障碍综合征 大承气汤 平滑肌 胃肠动力
 
Da Cheng Qi Decoction Mitigating the Damage of Intestinal Smooth Muscle of Rats with Multiple Organ Dysfunction Syndrome through Mitochondrial Pathway
Abstract
Objective: To observe the expression of mitochondrial related protein, Bcl-2 and Bax, and also NF-κ B in the small intestinal smooth muscle in rats with multiple organ dysfunction syndrome (MODS), and the intervention effect of Da Cheng Qi Decoction (DCQD), to study the mechanism of gastrointestinal motility disorders under MODS station, and also the effect of DCQD on MODS. Methods: One hundred healthy adult Wistar rats of both sexes, weighing 200-250g, were randomly divided into three groups：control group with 20 rats，MODS group with 40 rats and DCQD group with 40 rats. Under sterile condition, one millilitre suspension of 8×10⁸cfu/ml of Escherichia coli was injected into the peritoneal cavity of the rats in the MODS and DCQD group. The rats in control group was injected 1ml saline. The rats in DCQD group were administrated by gavage with DCQD, twice a day, before the suspension was injected. Twenty-four hours after injection, the proximal small intestine was used in the experiment. To detect the expression of Bcl-2, Bax, and NF-κ B, in small intestinal smooth muscle tissue using immunohistochemical staining. Results: Compared with control group, the expressions of Bax and NF-κ B in MODS group was increased significantly (P<0.05), and Bcl-2 was decreased significantly (P<0.05). Compared with MODS group, the expressions of Bax and NF-κ B in DCQD group was reduced significantly (P<0.05), and Bax was decreased significantly (P<0.05). Conclusions: DCQD promote the recovery of gastrointestinal motility by inhibiting the damage of small intestinal smooth muscle in rats with multiple organ dysfunction syndrome through mitochondrial pathway.
Key Words: multiple organ dysfunction syndrome  Da Cheng Qi Decotion  smooth muscle  gastrointestinal motility
 
多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS）是腹部外科患者死亡的重要原因之一。目前研究认为，胃肠道在MODS的发生中具有重要作用^[1]。胃肠动力下降可导致肠道细菌滋生、黏膜屏障受损、菌群移位，经由门静脉发生败血症和内毒素血症，最终导致MODS的发生^[2]。胃肠道运动功能已经是一项评价重症患者预后的重要指标^[3]。保护和恢复胃肠运动功能可以有效的防治MODS的发生和发展。

大承气汤是中医通理攻下的代表方剂，具有行气导滞、攻里泻下、活血化瘀、软坚散结的作用，在胃肠动力障碍性疾病的临床防治中已经取得了确切的疗效，但其机制尚不十分明了。本实验以细菌性腹膜炎致MODS大鼠模型为研究对象，运用免疫组化法检测大承气汤对大鼠小肠平滑肌Bcl-2、Bax和NF-κB表达的影响，探讨大承气汤保护MODS胃肠动力障碍的机制。

 
材料和方法
1 材料
1.1 实验动物和分组
实验动物为健康成年Wistar大鼠，数量100只，由大连医科大学动物实验中心提供的，雌雄各半，体重200g-250g。随机分为：对照组20只，MODS组40只，大承气汤组40只。
1.2 试剂和药品
小鼠抗大鼠Bcl-2抗体、小鼠抗大鼠Bax、小鼠抗大鼠NF-κB均购自美国Santa Cruz；即用型二步法检测试剂盒购自美国Golden Bridge International。
E.coli由大连医科大学附属第一医院检验科提供。
中药大承气颗粒冲剂由天津南开医院药厂提供。成分为：大黄12g，芒硝6g，厚朴9，枳实9g。
1.3 主要仪器
尼康SMZ800体视显微镜（Nikon，日本) ；组织切片机（Leica，德国）；Image-Pro Plus6.0软件（Media Cybernetics，美国）；SPSS13.0软件（SPSS，美国）。
2 方法
2.1 细菌性腹膜炎致MODS大鼠模型的建立和大承气汤治疗方法
按照陈哲宇等方法建立细菌性腹膜炎致MODS大鼠模型^[4]。简述如下：无菌条件下对照组每只大鼠腹腔注射1ml生理盐水。MODS组和大承气汤组每只大鼠向腹腔内注射大肠杆菌浓度为8×10⁸cfu/ml的混悬液1m1。大承气汤组大鼠于造模2日前开始灌服大承气汤。大承气汤为1g/ml，含生药100％，每次1mL/l00g，2次/日。
2.2 石蜡组织切片制备
建模24h后，脱颈处死存活大鼠，上段小肠清除内容物后，生理盐水漂洗， 4℃的4%多聚甲醛中固定过夜，依次梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡，用石蜡切片机制备厚度为5μm的小肠肌层切片标本，于多聚赖氨酸包被的载玻片上60℃过夜。
2.3 免疫组化检测小肠平滑肌组织Bcl-2、Bax和NF-κB蛋白表达
按超敏即用型二步法检测试剂盒说明书进行，简述如下：小肠肌层组织切片常规脱蜡、水化，3% H₂O₂去离子水孵育10 min；抗原修复液孵育15min；一抗4℃孵育过夜；滴加试剂1，37℃孵育20min；滴加试剂2，37℃孵育20min；DAB显色后苏木素复染；常规脱水、透明、封片。以PBS代替一抗做阴性对照，已知阳性切片做阳性对照。
采用Image-Pro Plus 6.0软件分析图像检测小肠肌层阳性表达区域的积分光密度（Integral optical density，IOD）。

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