【分　 类】 化工与理学
【关 键 词】 反相高效液相色谱，鸡血浆，氟喹诺酮。
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正文：

　　3. 2　标准曲线及最低检测限

　　将含有五种喹诺酮类药物的八种不同浓度的鸡血对照品溶液，取60mL进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归而得到回归方程，同时进行检测限分析，并将线性方程、线性范围、最低检测限(LOD)、定量限(LOQ)和相关系数等参数一并列出(见表2)。由表2可知，五种喹诺酮类药物检测限都比较低(0.003~0.005 μg/ml)，说明该方法具有较高的灵敏度。

　　图 1 色谱图(a)空白血浆, (b) 五种喹诺酮类药物的混合标准溶液，(c)加表后处理的血浆

　　Figure.1 Chromatograms of (a) blank chicken plasma (b) standards mixture with five fluoroquinolones (5.0μg/mL) (c) plasma spiked with five fluoroquinolones (5.0μg/mL).

　　表 2 线性方程、线性范围、最低检测限(LOD)、定量限(LOQ)和相关系数

　　Table 2 Validation data from calibration curves of five FQs in chicken plasma by RP-HPLC(n=5)

　　Compounds

　　LOD

　　(μg/mL)

　　LOQ

　　(μg /mL)

　　Linear range

　　(μg/mL)

　　Regression equation

　　R

　　LOM

　　0.005

　　0.05

　　0.05 ~ 50.0

　　y=1982.77+16902.25x

　　0.9998

　　GAT

　　0.005

　　0.05

　　0.05 ~ 50.0

　　y=5577.40+14722.59x

　　0.9991

　　OXA

　　0.003

　　0.05

　　0.05 ~ 50.0

　　y=2509.93+13036.38x

　　0.9994

　　FLU

　　0.005

　　0.05

　　0.05 ~ 50.0

　　y=-1139.04+16367.04x

　　0.9997

　　DAN

　　0.004

　　0.05

　　0.05 ~ 50.0

　　y=-5171.02+37402.40x

　　0.9993

　　3.3. 精密度

　　采用两种参数即保留时间和峰面积上述建立的五种喹诺酮类药物的HPLC法的精密度进行分析，实验采用高、中、低三种不同浓度的外加标准溶液的血浆对照品溶液(0.50，5.0和25.0 mg/mL)，在同一天连续进行5次进样计算相对误差来评价日内精密度;每天对上述浓度进行测定，每个浓度平行测定5次，连续测定5天计算相对误差来评价日间精度度。实验结果如表3所示，由此可见，各物质的色谱峰的保留时间的标准偏差低于1.7%，而峰面积的相对标准偏差低于5.0%，表明这种方法具有良好的精密度。

　　3.4稳定性

　　采用高、中、低三种不同浓度的外加标准溶液的血浆对照品溶液(0.50，5.0和25.0 mg/mL)考察五种喹诺酮类药物在鸡血中的稳定性。按照实验部分“2.6.4稳定性测定”进行测定，实验结果见表4。实验结果表明：在室温条件下，24小时内五种喹诺酮类药物在鸡血中具有较好的稳定性;在−20◦C下，五种喹诺酮类药物最少可储存两周。

　　表 3 日内和日间的精密度

　　Table 3 Precision of 0.50，5.0 and 25.0 mg/mL five QNs in chicken plasma by reversed -phase HPLC (n = 5)

　　Compounds

　　R.S.D (%)

　　Retention time

　　Integrated area

　　Run-to-run

　　Day-to-day

　　Run-to-run

　　Day-to-day

　　0.50

　　5.0

　　25.0

　　0.50

　　5.0

　　25.0

　　0.50

　　5.0

　　25.0

　　0.50

　　5.0

　　25.0

　　LOM

　　1.0

　　1.0

　　1.0

　　1.3

　　1.1

　　1.6

　　2.3

　　2.4

　　2.4

　　2.6

　　2.4

　　2.7

　　GAT

　　1.1

　　1.0

　　1.1

　　1.4

　　1.3

　　1.7

　　4.2

　　4.3

　　4.5

　　5.0

　　4.7

　　4.8

　　OXA

　　1.0

　　1.1

　　1.1

　　1.0

　　1.1

　　1.2

　　3.4

　　2.8

　　3.0

　　3.7

　　3.5

　　3.4

　　FLU

　　1.2

　　1.2

　　1.1

　　1.6

　　1.6

　　1.2

　　2.8

　　2.6

　　2.5

　　5.6

　　5.2

　　5.9

　　DAN

　　1.1

　　1.1

　　1.4

　　1.3

　　1.1

　　1.3

　　2.6

　　2.7

　　2.6

　　3.5

　　3.5

　　3.2

　　3.5 生物样品的分析

　　为了检验该方法用于分析五种喹诺酮类药物的方法的适用性，本文采用了让鸡口服这五种药物，分别收集它们的血浆进行分析。实验时，每只试验鸡喂食一粒各含20mg标准品的胶囊后，采血样进行了分析。图2给出了试验鸡在口服五种喹诺酮类药物后270分钟的血样经处理后得到的色谱图, 通过与图1比较可以看出，该方法可用于生物体内五种喹诺酮类药物的分析。通过先前建立的线性方程(见表2)和不同时间得到的五种喹诺酮类药物的峰面积，由此可计算出五种喹诺酮类药物在鸡口服后不同时间后在血浆中的浓度，由此可得到五种喹诺酮类药物在鸡体内的代谢情况(见图3)，其在体内的主要药代动力学参数如表5。

　　表 4 五种喹诺酮类药物在鸡血中的稳定性考察

　　Table 4 Stability of five QNs in chicken plasma sample (n=5)

　　Sample concentration

　　(mg /mL)

　　Concentration found (μg/mL)

　　Precision (%)

　　A

　　B

　　C

　　D

　　E

　　A

　　B

　　C

　　D

　　E

　　Short term for 24 h

　　0.50

　　0.50

　　0.51

　　0.50

　　0.49

　　0.49

　　3.1

　　4.8

　　5.4

　　5.4

　　6.6

　　5.0

　　5.3

　　5.3

　　5.0

　　5.0

　　5.0

　　2.4

　　2.5

　　2.9

　　4.7

　　5.6

　　25.0

　　26.6

　　25.5

　　24.1

　　23.2

　　24.2

　　2.2

　　2.4

　　2.0

　　4.2

　　4.8

　　Two weeks at -20℃

　　0.50

　　0.51

　　0.51

　　0.51

　　0.49

　　0.49

　　3.5

　　5.1

　　6.6

　　5.4

　　6.9

　　5.0

　　5.3

　　5.4

　　5.0

　　4.9

　　4.9

　　3.3

　　4.8

　　6.5

　　5.3

　　6.8

　　25.0

　　26.8

　　25.8

　　24.4

　　23.9

　　24.3

　　3.2

　　4.6

　　6.1

　　5.1

　　6.5

　　*The result was obtained from LOM (A), GAT (B), OXA (C), FLU (D) and DAN (E) with five measurements and the analytical conditions were as in Section 2.6.4.

　　取鸡服药270min的血浆0.90mL , 分别加入各标准溶液使制得0.50，5.0 和25.0 μg/mL三个浓度，按2.5的方法处理，取上清液60μL进样作HPLC分析。按标准曲线的回归方程计算实测浓度。每种浓度样品均重复5 次, 取均值计算该浓度样品的五种喹诺酮类药物回收率，其结果见表6，实验结果表明该方法具有较高的准确度。

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