选用20×300mm的层析柱，湿法装柱，树脂床体积为120ml，料液中葛根异黄酮浓度为1.50mg/ml,料液以1BV/h速度通过树脂柱床，共处理7BV料液，每处理1BV料液的流出液单独收集，测定流出液中异黄酮的浓度，结果见图2。从图2中可以看见，AB-8树脂吸附异黄酮浓度为1.50mg/ml料液时，从第二树脂床体积异黄酮就有很大泄漏，流出液中异黄酮浓度高达1.001mg/ml，但树脂床饱和吸附可达6BV。只有树脂达到完全饱和时才能充分发挥其吸附性能，因此考虑生产中采用树脂柱串联的方法。

　　2.4.3 乙醇浓度对AB-8树脂洗脱效果的影响

　　表8 不同乙醇浓度对树脂洗脱效果的影响

　　乙醇浓度/%

　　异黄酮洗脱率/%

　　产物纯度/%

　　异黄酮收率/%

　　60

　　72.20

　　29.05

　　1.91

　　70

　　74.40

　　34.20

　　1.96

　　80

　　77.62

　　28.40

　　2.05

　　95

　　79.70

　　31.40

　　2.10

　　将浓缩液注入树脂柱中，待样品液全部通过吸附柱后，用蒸馏水洗至流出液呈澄清状态，然后再分别用不同浓度乙醇洗脱，将洗脱液经旋转蒸发浓缩、真空干燥，测定异黄酮得量和纯度，由表8可以看出95%(v/v)乙醇洗脱异黄酮收集率最高，达79.79% ，而70%(v/v)乙醇洗脱后异黄酮纯度最高，为34.20%(m/m)，因此，本试验认为采用70%乙醇洗脱可以较好地达到纯化葛根异黄酮的目的。

　　2.4.4 流速对AB-8树脂吸附性能的影响

　　表9 不同流速对AB-8树脂吸附性能的影响

　　流速/(BV/h)

　　异黄酮洗脱率/%

　　异黄酮收率/%

　　1

　　89.87

　　2.38

　　2

　　85.43

　　2.26

　　3

　　84.29

　　2.23

　　从表9可知，流速不同，异黄酮的洗脱率和收率也不同，在1~3BV/h内，随着流速的增加，异黄酮的收率随之下降。考虑到工作的效率和异黄酮洗脱率，选用2BV/h流速较为适当。

　　2.4.5 原液pH值对AB-8树脂吸附性能的影响

　　表10 pH 值对AB-8树脂吸附性能的影响

　　pH值

　　异黄酮收率/%

　　产物纯度/%

　　异黄酮收率/%

　　3

　　83.20

　　48.98

　　2.19

　　4

　　85.17

　　33.65

　　2.25

　　5

　　87.46

　　30.98

　　2.31

　　6

　　72.20

　　34.20

　　1.91

　　7

　　69.97

　　31.88

　　1.85

　　8

　　69.22

　　26.78

　　1.83

　　异黄酮类物质属多酚类化合物，pH影响异黄酮物质在水中的溶解性从而影响树脂对其吸收附性能。实验中发现葛根异黄酮原液在较低pH时，溶液呈絮状浑浊状态，而随pH增加，原液逐渐澄清，并且不同pH值原液在树脂柱中的扩散转移速度也有明显差异，pH值越低，其扩散转移速度越慢。由表10可以看出，其纯度随pH值变化的而变化，pH3时，产物纯度最高，达48.98%，而pH5时，收率最高，达2.31%，但是实验中发现pH值为3和4时，絮状物在树脂柱上部形成沉淀，对树脂床污染和堵塞严重，因此认为适宜pH值为5。

　　3 结论

　　用乙醇溶液提取葛根异黄酮时，通过四组单因素试验和四因素三水平正交实验，以及用大孔树脂纯化葛根异黄酮时，通过四组单因素的试验，试验结果表明：

　　1)提取葛根异黄酮时，溶剂浓度为50%、固液比为1﹕8、提取温度为70℃、提取时间为2.5h时，浸出物中异黄酮的含量最高。

　　2)对六种树脂吸附葛根异黄酮性能进行对比筛选，发现AB-8树脂最适合葛根异黄酮的纯化。实验结果表明，洗脱剂乙醇浓度为70%(v/v)，工作液流速为2BV/h，浸提浓缩液pH值为5时，采用AB-8大孔吸附树脂串联柱对葛根异黄酮进行纯化，其效果最优，产品的收率和纯度都较高。

　　参 考 文 献

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