1.65
1.93
1.91
1.91
1.88
注:其他提取条件:乙醇浓度50%,固液比1﹕8,温度60℃
2.1.4 提取温度对葛根异黄酮浸提效果的影响
在溶剂浓度、固液比和提取时间都为最佳条件时,采取不同的提取温度对葛根异黄酮进行浸提,结果(见表4)表明:提取温度为70℃时效果最佳。一般来说异黄酮随温度升高而在乙醇中溶解度增大,因为温度升高异黄酮浸取液粘度减小,扩散系数增大,促使浸提速度加快,浸取率提高,浸出物异黄酮含量增加,但温度太高,会使乙醇挥发丢失,致使溶剂浓度下降,达不到最佳效果,表4中温度为90℃时黄酮含量明显降低就是此原因。同时温度太高,某些活性成分可能遭到破坏,杂质溶出增多,操作不便,故浸提时温度不能太高。
表4 提取温度对葛根异黄酮浸提效果的影响
浸 提 温 度 (℃)
50
60
70
80
90
吸 光 度 (A)
0.646
0.687
0.790
0.787
0.546
异黄酮含量(mg·ml-1)
1.63
1.72
1.97
1.96
1.39
注:其他提取条件:乙醇浓度50%,固液比1﹕8,时间2h
2.2 葛根异黄酮提取的正交试验
在以上单因素试验的基础上,对影响葛根异黄酮浸提效果的因素进行了正交试验,结果(见表5、6)表明:4个因素对浸出物异黄酮含量的影响与前面单因素试验结果趋势一致。对浸出物异黄酮含量影响主次关系顺序为:溶剂浓度>固液比>温度>时间;最佳的提取工艺条件为:乙醇浓度为50%、固液比为1﹕8、时间为2.5h、温度为70℃。
表5 正交试验因素水平表
水 平
因 素
溶剂浓度(%)A
固液比B
时间(min)C
温度(℃)D
1
40
1﹕6
90
60
2
50
1﹕8
120
70
3
60
1﹕10
150
80
表6 正交试验表
试验序号
乙醇浓度
(%)A
固液比
B
时间
(min)C
温度(℃)D
吸光度
(A)
异黄酮含量
(mg·ml-1)
1
A1
B1
C1
D1
0.678
1.703
2
A1
B2
C2
D2
0.934
2.317
3
A1
B3
C3
D3
0.575
1.456
4
A2
B1
C2
D3
0.801
1.998
5
A2
B2
C3
D1
0.931
2.309
6
A2
B3
C1
D2
0.685
1.719
7
A3
B1
C3
D2
0.650
1.635
8
A3
B2
C1
D3
0.365
0.9520
9
A3
B3
C2
D1
0.389
1.010
指
标
之
和
K1
5.476
5.336
4.374
5.022
主次因素A>B>D>C
最佳组合A2B2C3D2
K2
6.026
5.578
5.325
5.671
K3
3.597
4.185
5.400
4.406
平
均
值
R1
1.825
1.779
1.458
1.674
R2
2.009
1.859
1.775
1.890
R3
1.199
1.395
1.800
1.469
极值
R
0.810
0.464
0.342
0.421
2.3 葛根异黄酮提取液的制备
经正交试验,得出提取葛根异黄酮的最佳组合因素,通过此组合因素对葛根进行浸提,提取液异黄酮含量为2.34mg·ml-1,将提取液浓缩至最小体积,加3~4倍浓度为95%乙醇沉降水溶性高分子多糖、蛋白质杂质,经离心去除沉淀,经旋转蒸发器浓缩得葛根异黄酮提取浓缩液,经测定其葛根异黄酮的含量为11.93mg·ml-1,备用。
2.4 葛根异黄酮的大孔树脂纯化
2.4.1 大孔吸附树脂对葛根异黄酮的静态吸附效果比较
将经过预处理的6种大孔树脂去除表面水后,各取2.5g分别置于具塞磨口三角瓶中,加入异黄酮浓度为11.93mg/ml的提取浓缩液25ml ,振荡24h,使树脂充分吸附异黄酮后测定树脂的静态吸附效果,过滤取出吸附饱和的树脂(得滤液1),向其中加入50ml的95%(v/v)乙醇振荡24h使异黄酮解吸附,再过滤(得滤液2),分别测定滤液1和滤液2中异黄酮的浓度,结果如表7。
表7 6种大孔树脂对葛根异黄酮的静态吸附效果比较
树脂种类
滤液1浓度/mg.ml-1
吸附量
mg
吸附率
/%
滤液2浓度
/mg.ml-1
解吸量
/mg
解吸率
/%
AB-8
8.72
80.25
26.91
2.90
72.39
90.12
HPD100
9.03
72.50
24.31
2.60
65.05
89.69
HPD600
8.81
78.50
26.32
2.81
70.29
90.20
ADS-5
8.65
82.00
27.49
2.85
71.19
86.82
ADS-7
9.03
72.50
24.31
1.91
47.84
65.99
ADS-17
9.44
62.25
20.87
2.26
56.50
90.76
由表7可以看出,6种树脂对葛根异黄酮的吸附率AB-8和ADS-5最高,分别达到26.91%(m/m)和27.49%(m/m),而解吸率则AB-8、HPD600和ADS-17 的最高,都达到了90%以上,解吸效果非常优良,而ADS-5树脂的解吸效果一般,只有86.82%。和有关文献对比,本研究树脂对异黄酮的吸附率普遍较低,其原因可能是其他研究大都利用纯化的标准品进行实验,而本研究直接以葛根异黄酮提取浓缩液为材料,提取液中的其他成分可能是造成这种差异的主要原因。综合对比之下,AB-8树脂对葛根异黄酮的吸附效果最好,因此,下面进一步对AB-8树脂对葛根异黄酮的动态吸附进行探讨。
2.4.2 AB-8树脂的动态吸附及解吸附效果
图2 AB-8树脂对葛根异黄酮的动态吸附效果