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葛根异黄酮的分离与纯化
来源:互联网 sk006 | 肖芳
【分  类】 化工与理学
【关 键 词】 葛根,异黄酮,提取,大孔吸附树脂,纯化
【来  源】 互联网
【收  录】 中文学术期刊网
正文:

  1.65

  1.93

  1.91

  1.91

  1.88

  注:其他提取条件:乙醇浓度50%,固液比1﹕8,温度60℃

  2.1.4 提取温度对葛根异黄酮浸提效果的影响

  在溶剂浓度、固液比和提取时间都为最佳条件时,采取不同的提取温度对葛根异黄酮进行浸提,结果(见表4)表明:提取温度为70℃时效果最佳。一般来说异黄酮随温度升高而在乙醇中溶解度增大,因为温度升高异黄酮浸取液粘度减小,扩散系数增大,促使浸提速度加快,浸取率提高,浸出物异黄酮含量增加,但温度太高,会使乙醇挥发丢失,致使溶剂浓度下降,达不到最佳效果,表4中温度为90℃时黄酮含量明显降低就是此原因。同时温度太高,某些活性成分可能遭到破坏,杂质溶出增多,操作不便,故浸提时温度不能太高。

  表4 提取温度对葛根异黄酮浸提效果的影响

  浸 提 温 度 (℃)

  50

  60

  70

  80

  90

  吸 光 度 (A)

  0.646

  0.687

  0.790

  0.787

  0.546

  异黄酮含量(mg·ml-1)

  1.63

  1.72

  1.97

  1.96

  1.39

  注:其他提取条件:乙醇浓度50%,固液比1﹕8,时间2h

  2.2 葛根异黄酮提取的正交试验

  在以上单因素试验的基础上,对影响葛根异黄酮浸提效果的因素进行了正交试验,结果(见表5、6)表明:4个因素对浸出物异黄酮含量的影响与前面单因素试验结果趋势一致。对浸出物异黄酮含量影响主次关系顺序为:溶剂浓度>固液比>温度>时间;最佳的提取工艺条件为:乙醇浓度为50%、固液比为1﹕8、时间为2.5h、温度为70℃。

  表5 正交试验因素水平表

  水 平

  因 素

  溶剂浓度(%)A

  固液比B

  时间(min)C

  温度(℃)D

  1

  40

  1﹕6

  90

  60

  2

  50

  1﹕8

  120

  70

  3

  60

  1﹕10

  150

  80

  表6 正交试验表

  试验序号

  乙醇浓度

  (%)A

  固液比

  B

  时间

  (min)C

  温度(℃)D

  吸光度

  (A)

  异黄酮含量

  (mg·ml-1)

  1

  A1

  B1

  C1

  D1

  0.678

  1.703

  2

  A1

  B2

  C2

  D2

  0.934

  2.317

  3

  A1

  B3

  C3

  D3

  0.575

  1.456

  4

  A2

  B1

  C2

  D3

  0.801

  1.998

  5

  A2

  B2

  C3

  D1

  0.931

  2.309

  6

  A2

  B3

  C1

  D2

  0.685

  1.719

  7

  A3

  B1

  C3

  D2

  0.650

  1.635

  8

  A3

  B2

  C1

  D3

  0.365

  0.9520

  9

  A3

  B3

  C2

  D1

  0.389

  1.010

  指

  标

  之

  和

  K1

  5.476

  5.336

  4.374

  5.022

  主次因素A>B>D>C

  最佳组合A2B2C3D2

  K2

  6.026

  5.578

  5.325

  5.671

  K3

  3.597

  4.185

  5.400

  4.406

  平

  均

  值

  R1

  1.825

  1.779

  1.458

  1.674

  R2

  2.009

  1.859

  1.775

  1.890

  R3

  1.199

  1.395

  1.800

  1.469

  极值

  R

  0.810

  0.464

  0.342

  0.421

  2.3 葛根异黄酮提取液的制备

  经正交试验,得出提取葛根异黄酮的最佳组合因素,通过此组合因素对葛根进行浸提,提取液异黄酮含量为2.34mg·ml-1,将提取液浓缩至最小体积,加3~4倍浓度为95%乙醇沉降水溶性高分子多糖、蛋白质杂质,经离心去除沉淀,经旋转蒸发器浓缩得葛根异黄酮提取浓缩液,经测定其葛根异黄酮的含量为11.93mg·ml-1,备用。

  2.4 葛根异黄酮的大孔树脂纯化

  2.4.1 大孔吸附树脂对葛根异黄酮的静态吸附效果比较

  将经过预处理的6种大孔树脂去除表面水后,各取2.5g分别置于具塞磨口三角瓶中,加入异黄酮浓度为11.93mg/ml的提取浓缩液25ml ,振荡24h,使树脂充分吸附异黄酮后测定树脂的静态吸附效果,过滤取出吸附饱和的树脂(得滤液1),向其中加入50ml的95%(v/v)乙醇振荡24h使异黄酮解吸附,再过滤(得滤液2),分别测定滤液1和滤液2中异黄酮的浓度,结果如表7。

  表7 6种大孔树脂对葛根异黄酮的静态吸附效果比较

  树脂种类

  滤液1浓度/mg.ml-1

  吸附量

  mg

  吸附率

  /%

  滤液2浓度

  /mg.ml-1

  解吸量

  /mg

  解吸率

  /%

  AB-8

  8.72

  80.25

  26.91

  2.90

  72.39

  90.12

  HPD100

  9.03

  72.50

  24.31

  2.60

  65.05

  89.69

  HPD600

  8.81

  78.50

  26.32

  2.81

  70.29

  90.20

  ADS-5

  8.65

  82.00

  27.49

  2.85

  71.19

  86.82

  ADS-7

  9.03

  72.50

  24.31

  1.91

  47.84

  65.99

  ADS-17

  9.44

  62.25

  20.87

  2.26

  56.50

  90.76

  由表7可以看出,6种树脂对葛根异黄酮的吸附率AB-8和ADS-5最高,分别达到26.91%(m/m)和27.49%(m/m),而解吸率则AB-8、HPD600和ADS-17 的最高,都达到了90%以上,解吸效果非常优良,而ADS-5树脂的解吸效果一般,只有86.82%。和有关文献对比,本研究树脂对异黄酮的吸附率普遍较低,其原因可能是其他研究大都利用纯化的标准品进行实验,而本研究直接以葛根异黄酮提取浓缩液为材料,提取液中的其他成分可能是造成这种差异的主要原因。综合对比之下,AB-8树脂对葛根异黄酮的吸附效果最好,因此,下面进一步对AB-8树脂对葛根异黄酮的动态吸附进行探讨。

  2.4.2 AB-8树脂的动态吸附及解吸附效果

  图2 AB-8树脂对葛根异黄酮的动态吸附效果

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