摘要：本试验采用3×3拉丁方设计，在日粮中添加0%(对照组)、1.5%(处理1)、3%(处理2)的缩合单宁对牛进行饲喂试验。研究其对瘤胃挥发性脂肪酸含量及微生物生长的影响。由试验结果可知：添加3%的缩合单宁可显著降低瘤胃蛋白质降解细菌的数量，并能显著增加量乙酸的含量。

　　关键词：缩合单宁;瘤胃细菌;挥发性脂肪酸

　　随着对反刍动物蛋白质营养研究的不断深入与发展，人们发现仅仅依靠微生物合成蛋白质，为反刍动物提供氮源已经不能满足其营养需要。因此，怎样提高饲料中蛋白质的利用率成为现在研究的热点。Molan等(2001)[1]研究发现400 mg/ml或更高浓度的缩合单宁能抑制瘤胃许多种细菌的生长，证明缩合单宁可以影响瘤胃挥发性脂肪酸的含量。但是缩合单宁也有危害性，Silanikove等(1996)[2]研究发现采食过多或经常采食富含单宁的饲料会引起反刍动物中毒，损伤肝、肾等组织。本试验主要是选用榛子叶缩合单宁，通过体内法研究不同浓度的缩合单宁对反刍动物瘤胃挥发性脂肪酸含量及微生物生长的影响，为缩合单宁在反刍动物的营养应用提供参考。

　　1 材料与方法

　　1.1 试验设计

　　采用3×3拉丁方设计。对照组、处理1和处理2组分别添加0%、1.5%和3%的缩合单宁。

　　1.2 缩合单宁的获取

　　试验用的缩合单宁是采集野生的榛子树叶，经过自然干燥。应用Porter等[3]研究的方法对缩合单宁进行提取。

　　1.3 试验动物及管理

　　试验在延边大学农学院牧场进行，选择3只体重为(300±20 Kg)安装永久瘤胃瘘管的延边黄牛，供采集瘤胃液使用。试验牛每日于早上08：00和18：00饲喂等量的饲料，自由饮水并正常驱虫。饲粮是根据美国NRC(1996)标准配制成。配方及营养水平见表1.1。

　　表1.1 供试牛日粮配方及营养水平

　　Table 1.1 Composition and nutrient level (%) of concentrate

　　组分(Ingredients)

　　百分比

　　营养水平 (Nutrient Level)

　　玉米(Corn)

　　42.44

　　肉牛综合净能(RND)

　　42.51

　　麦麸(Soybean meal)

　　2.66

　　粗蛋白(CP)

　　18.53

　　豆粕(Rice bran)

　　7.93

　　粗脂肪(EE)

　　5.80

　　食盐(Salt)

　　0.50

　　粗纤维(CF)

　　13.07

　　预混料添加剂(Additive)

　　1.00

　　粗灰分(Ash)

　　4.67

　　玉米青贮(Corn silage)

　　34.99

　　钙(Ca)

　　0.36

　　紫花苜蓿(sativa)

　　5.01

　　磷(P)

　　0.17

　　注：表中各个物质的量以干物质为基础。

　　1.4 测定项目及方法

　　1.4.1 PH值测定

　　用PHS-3C型酸度计进行测定。

　　1.4.2 挥发性脂肪酸(VFA)的测定

　　将装有瘤胃液的离心管从-25℃冰箱中取出，使样品缓慢地解冻，取上清液0.4ml，加入0.2ml25%偏磷酸溶液(含内标2-乙基丁酸)，振荡混合均匀，冰浴30min以上，10000rpm，4℃下离心10min，取上清液，用HP6890气相色谱仪测定总挥发性脂肪酸、乙酸、丙酸、丁酸的含量。

　　气相色谱条件：

　　色谱柱：HP1909IN-213 最高使用温度为260℃，HP-INNOWAX Polyethylene Glycol;毛细管30m×320um×0.50um;载气：氮气，流速为2ml/min;柱箱温度：程序升温，50℃(0.5min)至120℃(6min)此期以每分钟30℃的速度升温，再升温至220℃，保持3min，期间以30℃/min的速率升温;进样量：1ul，进样口温度为200℃;检测器：FID检测器，温度为250℃。

　　1.4.3 细菌数量的测定

　　通过厌氧培养法，并以菌落总数分析仪进行测定。

　　1.5 数据统计

　　试验数据先用Excel进行处理,再采用spass软件(spass 11.5 for windows)中单因素方差分析过程(one-Way ANOVA)进行统计，均值的多重比较采用其中的LSD法进行分析。试验数据用平均数±标准误差表示。

　　2 结果与分析

　　2.1 缩合单宁对瘤胃pH值的影响

　　图2.1瘤胃液pH值的变化

　　Fig. 2.1 Changes of pH in rumen

　　由图2.1可见，各组的pH值呈先下降后上升的趋势，在采食3小时后各组的pH值最小，之后逐渐回升到初始状态。但处理组各个时间点pH值较高，对照组和处理1、处理2之间差异不显著(p>0.05)。但随着缩合单宁含量的添加量的增加，pH值呈上升的趋势。

　　2.2 缩合单宁对瘤胃细菌的影响

　　表2.1瘤胃内细菌的变化(单位：CFU/ml))

　　Table 2.1 Changes of rumen bacteria in rumen

　　项目

　　对照组

　　处理1

　　处理2

　　蛋白质降解细菌(×108CFU/ml)

　　9.97±1.89a

　　5.94±0.87b

　　5.61±0.33b

　　纤维素降解细菌(×107CFU/ml)

　　5.56±1.45

　　3.87±0.67

　　3.54±0.36

　　淀粉降解细菌(×108CFU/ml)

　　11.51±1.23

　　10.69±0.71

　　10.22±1.02

　　总活菌(×109CFU/ml)

　　7.85±1.15

　　6.43±0.88

　　6.14±0.95

　　注：同行不同字母表示差异显著(P<0.05)。

　　由表2.1可见，处理组的蛋白质降解细菌的含量显著低于对照组(P<0.05);处理组纤维素降解细菌数、淀粉降解细菌数、总活菌数均低于对照组，但各组之间差异不显著(P>0.05)。

　　2.3 缩合单宁对瘤胃液挥发性脂肪酸的影响

　　图2.2 TVFA浓度变化 图2.3 乙酸浓度变化

　　Fig. 2.2 Changes of TVFA concentration in rumen Fig. 2.3 Changes of acetate concentration in rumen

　　图2.4 丙酸浓度变化 图2.5 丁酸浓度变化

　　Fig. 2.4 Changes of propionate concentration in rumen Fig. 2.5 Changes of butyrate concentration in rumen

　　图2.6 乙酸/丙酸的变化趋势

　　Fig. 2.6 Changes of A/P in rumen

　　由图2.2可以看出对于总挥发性脂肪酸的浓度，总的变化范围在83.95～67.69 mmol/100ml之间，各组变化趋势都一致，均在下次饲喂前达到最低值，饲喂后3h达到最大值。

　　乙酸浓度的变化，从图2.3可见，各个组均呈先上升后下降得趋势。在3h时处理1达到最大值。6h时照组、处理2达到最大值。之后逐渐下降。切对照组一直处于较高趋势。但个个时间点各个组差异不显著(p>0.05)。

　　丙酸浓度的变化，从图2.4可见，各组呈先上升后下降的趋势，在3h时各组达到最大值，之后逐渐下降。处理2在各个时间点均显著高于对照组(P<0.05)。说明添加高浓度的缩合单宁能提高丙酸的含量。

　　丁酸浓度的变化，由图2.5可见，各组呈先上升后下降的趋势，在3小时时各组达到最大值。且各个时间点各组之间差异不显著(p>0.05)，但处理2组在个时间点较高。

　　乙酸与丙酸的比值变化，从图2.6可见，各组呈先下降后上升的趋势。对照组的乙酸与丙酸的比值一直处于最高，处理组均低于对照组，但各处理组间在各个时间点差异均不显著(p>0.05)。

　　3 讨论

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