【分　 类】 医药卫生
【关 键 词】 Graves 病；Th17细胞；IL- 23 /Th17 轴；发病机制
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正文：
 [摘要] 目的：探讨Th17细胞及IL- 23 /Th17轴相关因子IL-17、IL-23、IL-22在 GD 发病机制中的作用及意义。方法：收集初诊的GD患者31 例为GD初发组，均采用131I治疗，随访至甲状腺功能正常，另选年龄、 性别匹配的29 例正常人作为正常对照组。应用流式细胞仪技术检测外周血中 Th17细胞比例。采用ELISA 法检测各组血清 IL- 17、 IL- 22、 IL- 23 水平。结果：GD初发组外周血Th17细胞比例较正常对照组明显升高( P ＜ 0．01)；血清中IL- 17、 IL- 23 水平在GD初发组明显高于正常对照组、GD病缓解组( P ＜ 0．01)；比较GD缓解组与正常对照组中Th17细胞比例及IL-17、IL-23水平无统计学差异( P ＞ 0． 05)；IL- 22 治疗前后水平无统计学差异( P ＞ 0． 05) 。采用双变量相关性分析得出Th17、IL- 17、 IL- 23 与FT3、 FT4 呈正相关，与TSH 呈负相关 。结论：Th17细胞及IL-23 /Th17 轴相关因子IL17、IL-23在初发 GD 中高表达， IL- 23 /Th17 轴可能参与了GD 的发病过程。
     [关键词] Graves 病；Th17细胞；IL- 23 /Th17 轴；发病机制
The change of the IL- 23 /Th17 axis levels in Graves disease 
GUO Zehua,YU Shipeng,YI Pengfei,WANG Na,XU Xuan
Shandong University, Ji'nan ,250100，China
     ［Abstract］Objective: To analyze the role of IL- 23 /Th17 axis in the pathogenesis of Graves disease ( GD),by examine the proportion of peripheral of Th17 cells and the IL- 23 /Th17 axis relevant factor ( IL- 17,IL- 23,IL- 22) levels with GD patients.Methods:This study colleted 31 patients with GD who were newly diagnosed and reevaluated the GD group after the 131I treatment.29 age- and sex- matched volunteers were selected as the healthy control group.The Th17 lymphocytes cells were investigated by flow cytometry analysis.The levels of serum IL- 17,IL- 23 and IL- 22 were measured by ELISA. Results: The proportion of peripheral Th17 cells were increased in the GD patients compared with the control group( P ＜ 0.01).In GD patients,the plasma concentrations of IL- 17,IL- 23 were significantly increased compared to the normal control group and euthyroid GD group( P ＜ 0.01),but there was no obviously change in IL-22( P ＞ 0.05).In euthyroid GD patients，the Th17,IL- 17,IL-23 did not changed compare with the normal control group( P ＞ 0.05).Bivariate correlations revealed that Th17,IL- 17,IL- 23 were strongly associated positively with FT3,FT4,but correlated negatively with TSH. Conclusion: Th17,IL17,IL-23 are highly expressed in the GD group.IL- 23 /Th17 axis may involve in the pathogenesis of GD.
    ［Key words］Graves disease; Th17 cell; IL- 23 /Th17 axis; Pathogenesis
    Graves 病( Graves disease， GD) 是一种伴甲状腺素合成增多的器官特异性自身免疫性疾病， 流行病学调查显示，普通人群患病率约为1%，并有逐年增加的趋势。GD 确切的发病机制尚未完全阐明，目前大量研究表明免疫因素在其发病过程中起着关键作用。而近年研究发现CD4 +T 细胞的一个新分支 Thl7 细胞，能产生 IL-17、IL-17F 和 IL-22 等细胞因子，参与免疫调节、机体防御、自身免疫性疾病以及其他慢性炎症反应[1]。另有报道 IL-23 对维持 Th17 细胞稳定和促进 Th17 细胞增殖有重要作用[2]，其与自身免疫疾病的关系受到重视。本实验通过检测GD患者外周血Th17 细胞及IL-23 /Th17 轴相关因子水平变化，探讨 IL- 23 /Th17 轴在 GD 发病及疾病转归中的意义。
1材料与方法
1.1研究对象 实验分组：研究对象均来自济宁医学院附属医院内分泌科2013 年10 月至 2013 年11月住院患者，按《中国甲状腺疾病诊治指南》[3]中Graves 病诊断标准选取，并除外其他自身免疫性疾、感染、妊娠、皮质类固醇或免疫抑制剂的使用者。Graves 病初发组(GD组)：为初次诊断为Graves病且未经治疗患者共31例，男性9例，女性22例；Graves 病缓解组（eGD组）：上述 31 例初发 Graves 病患者经131I治疗后随访至甲状腺功能恢复正常。正常对照组（normal control group  NC组）：选择同期29 名性别、年龄相匹配且无新近感染、自身免疫疾病的家族史的健康体检者。
 
1.2试剂和仪器  RPMI1640 培养液及胎牛血清购自 Hyclone 公司；佛波酯( PMA) 和离子霉素购自美国 Enzo LifeSciences 公司；莫能霉素、固定/破膜剂( FIX＆PERM)  购自美国 eBioscience 公司；异硫氰酸荧光素( FITC) 标记的鼠抗人CD4 抗体和藻红蛋白( PE) 标记的鼠抗人IL-17A 抗体及其相匹配的同型对照购自美国 BD 公司；IL- 17、IL-23、IL-22 ELISA 试剂盒购自 R＆D 公司；流式细胞仪为美国BD 公司 FACS CantoTM 型。
 
1.3 方法
1.3.1 131I 治疗方案  GD组患者均自愿选择放射性131I 治疗， 并签署知情同意书。 131I 剂量( uCi) = 甲状腺重量( g) ×每克甲状腺组织131I 给予剂量( uCi /g) /24 小时摄碘率( %)， 再结合患者的年龄、病情、病程、甲状腺质地等个体情况适当加减剂量， 选择4 ～ 5 mCi 一次性口服治疗。
 
1.3.2 标本收集和外周血单个核细胞的分离   所有对象均于空腹时抽取肘静脉血，生化管收集2 ml，2 500 r /min 离心5 min， 取血清冻存于 － 80℃， 用于检测IL- 17 、IL-23、IL-22水平； 肝素抗凝管收集 3 ml， 人淋巴细胞分离液( Ficoll) 密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞( PBMC) ， 用含10%胎牛血清的RPMI 1640 培养液调整细胞浓度至 2 × 106个/ml， 用于流式细胞学检测；所有标本均在4 h 内处理。
 
1.3.3 Th17细胞检测  将调整好浓度的 PBMC悬液置于24 孔培养板中， 依次加入 PMA 25 ng /ml、离子霉素 1. 25 g /ml 和莫能霉素 1. 7 g /ml， 在37℃ 5% CO2 细胞培养箱中培养 6 ～ 8 h；收集细胞，根据细胞计数等分为测定管和对照管，每管中加入20μl  CD4 －FITC 单抗进行细胞外染色，PBS 洗涤，再先后加入FIX＆PERM 的A 液( 即固定剂)100 μl、B 液( 即破膜剂) 100μl进行固定破膜，PBS 洗涤后，测定管中加入 PE IL-17A 20μl， 对照管中加入相应的同型对照抗体行细胞内染色，PBS 洗涤两次后上流式细胞仪检测，用 CellsQuest软件获取分析数据，以CD4+IL-17A+表示Th17细胞亚群。
 
1.3.4 血清IL-23、IL-17、IL-22检测  应用 ELISA 试剂盒进行检测， 操作过程按说明书进行， 实验中设置空白对照和阴性对照以保证检测结果的可靠性。
 
1.4 统计学处理  应用 SPSS 17. 0 统计软件进行分析，计量资料采用 表示，各组之间采用方差齐性检验、方差分析，Th17 细胞及血清 IL- 17、IL- 23 、IL-22水平与 FT3 、FT4、 TSH 相关性采用 Spearman 分析， P ＜0．05 为差异有统计学意义。
 
2结果
2.1 一般临床资料比较   年龄、性别、病例数比较，差异均无统计学意义；GD组与NC组相比，游离三碘甲腺原氨酸( FT3 ) 游离甲状腺素(  FT4 ) 显著高于正常对照组，促甲状腺激素水平( TSH) 明显低于正常对照组( P＜ 0. 05) ，eGD组较NC组无明显统计学差异；GD组、eGD组甲状腺过氧化物酶抗体( TPOAb) 、甲状腺球蛋白抗体( TGAb) 和促甲状腺素受体抗体( TRAb) 阳性率均高于正常对照组，差异有统计学意义。 见表1
 
 
表1 各组甲状腺指标比较（）
Tab． 1 Thyroid hormones and auto- antibodies of different groups（）
Group
N
年龄
性别
（男/女）

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