由表3，对回归方程各项的方差分析结果表明，由此所建立的模型显著(p<0.5);X2，X22，X32，X42项影响是极显著(p<0.01); X1，X3，X1X2，X1X4，X4，X12，X1X3，X2X3项对DH的影响为不显著(p>0.5)。可以看出各试验因素对响应值YTCA-SN的影响不应该是线性简单的关系，响应值的变化相当复杂。所以，在一定条件下调节底物浓度、温度、pH值和加酶量的相互作用关系，可以使酶解产物中多肽含量达到最大水平。从上表中可以看出影响多肽含量的各种因素由强到弱的依次是底物浓度X2，温度X3，pH值X4，加酶量 X1。模型可信度分析如表3-6

　　表4 模型可信度分析

　　Table 4 Reliability analysis of the model Master Model Predictive Model Mean 11.74741 11.74741 R-square 80.07% 80.07% RMSE 0.765845 0.765845 CV 6.519269 6.519269 表中复相关系数R=0.8007，表明此4个因素及其所组成的二次项的模型能解释多肽含量变化的80.07%，因此回归方程给碱性蛋白酶水解鲫鱼蛋白提供了一个比较合适的模型。

　　2.3 各因素间交互作用对TCA-SN的响应面分析

　　下面以极显著项X2和其他项X1、X3、X4分别进行分析比较，图1，图2，图3为响应面分析软件得到的响应面图和等高线图，从图中可以清晰地看出，X2与X1、X3、X4之间的交互情况，而且回归模型确实存在最大值。

　　图1 底物浓度和pH值交互作用的响应面和等值线图

　　Fig.3-12 Response surface and isogram of concentration of substrate and pH interaction

　　图2 底物浓度和温度交互作用的响应面和等值线图

　　Fig.3-13 Response surface and isogram of concentration of substrate and temperature interaction

　　图3 底物浓度和加酶量交互作用的响应面和等值线图

　　Fig.3-14 Response surface and isogram of concentration of substrate and enzyme quantity interaction

　　为了求出最佳点的编码值，对回归方程取一阶偏导并整理得到：

　　0.538333- 3.208334×X1- 0.0075×X2 + 1.17×X3 - 0.2275×X4=0

　　- 2.111667- 0.0075×X1- 8.878234×X2- 0.5725×X3+ 0.75×X4=0

　　- 0.133333+ 1.17×X1- 0.5725×X2- 7.998234×X3 + 0.6325×X4=0

　　- 0.748333- 0.2275×X1+ 0.75×X2+ 0.6325×X3- 5.528234×X4=0

　　解得：X1=0.12，X2=0.2，X3=-0.29，X4=-0.15。所以稳定点(X1，X2，X3，X4)的编码值为(0.12，0.2，-0.29，-0.15)，加酶量(X1)= 1.560%，底物浓度(X2)= 1.60%，温度(X3)= 43.55℃，pH(X4)= 9.425，此时TCA的最大估计值Y=32.034%。考虑到实际操作的便利，确定碱性蛋白酶酶解鲫鱼蛋白的技术参数为加酶量1.54%，底物浓度1.3%，温度46.6℃，pH9.4。

　　2.4鲫鱼小分子肽清除DPPH自由基能力

　　由图5.1可知，鲫鱼小分子肽对DPPH自由基的清除效果随着分离肽浓度的增加而增强，在浓度为1g/L时清除作用能达到60%，此时Vc的清除作用已经达到100%，故鲫鱼小分子肽清除DPPH自由基能力不如Vc。

　　图4 鲫鱼肽对DPPH清除作用

　　Fig.4 Carp peptideto DPPH scavenging action

　　2.5鲫鱼小分子肽清除超氧阴离子自由基(O2·)能力

　　由图5可知，鲫鱼小分子肽对超氧阴离子自由基(O2·)的清除效果随着小分子肽浓度的增加而增强，在小分子肽达到1g/L时清除作用能达到83%，通过两条曲线的对比可看出，鲫鱼小分子肽的抗超氧阴离子自由基的能力接近于Vc，是一种良好的抗氧化剂。

　　图5鲫鱼肽对O2·清除作用

　　Fig.5Carp peptideto O2· scavenging action

　　3总结

　　通过试验分析发现，碱性蛋白酶酶解鲫鱼蛋白的技术参数为加酶量1.54%，底物浓度1.3%，温度46.6℃，pH9.4，肽得率最高为32.034%。鲫鱼小分子肽对DPPH自由基有清除效果，在浓度为1g/L时清除作用能达到60%，但其清除能力不如Vc;鲫鱼小分子肽对超氧阴离子自由基(O2·)的清除效果要好于其对DPPH自由基有清除效果，在质量浓度为1g/L时清除作用能达到83%，其抗超氧阴离子自由基的能力接近于Vc，是一种良好的抗氧化剂。

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