摘要目的 分析免疫浊度法降钙素原(PCT)的校准曲线，确定检测线性范围。方法将高浓度校准品按比例配置不同浓度校准物，比对分析校准曲线，确定检测线性范围。结果 PCT校准品浓度上限50.00(ng/ml)，校准曲线中20与 50(ng/ml)浓度之间线性不佳，28.57- 35.71(ng/ml)之间曲线上升缓慢，35.71ng/ml后曲线变得平坦，不能检测过高浓度PCT标本,经稀释校准物后确定最大线性范围为30.00ng/ml，高于此浓度或结果出现异常报警符号，应稀释标本重做。结论 免疫浊度法PCT因方法学特点，高浓度校准品有时会出现浓度与吸光度值(OD)变化的不平行，获得的校准曲线不能真实反应高值浓度的变化;可通过稀释高浓度校准品的方法获得校准曲线的线性范围和标本检测上限。

　　关键词胶乳增强免疫浊度法;校准曲线;线性范围;降钙素原

　　图分类号：R446.112 文献标识码：A

　　降钙素原(PCT)作为诊断及监测细菌感染以及感染引起的脓毒症的重要指标广泛应用于临床，免疫浊度法因快速、稳定、准确、经济等优势已然成为目前测定PCT的主要方法[1-3]。工作中发现：受抗体的浓度及效价、抗原抗体反应比例等多种因素影响和制约[4-5]，PCT的抗体浓度或效价不足以与对应的高值校准物

　　匹配，产生钩状效应，致使相对应的校准曲线上升缓慢或平坦，不能准确地体现高值校准品及高浓度标本真正的吸光度值变化，导致结果的高值低报和异常。现探讨如何科学界定PCT校准曲线的线性范围及标本检测上限，报告如下：

　　1资料与方法

　　1.1试剂和仪器：

　　1.1 A组所用仪器为奥林帕斯Au640全自动生化分析仪，单位ng/ml，试剂、校准品(DL7105A)以及质控品(DL7104B)均为北京万泰德瑞诊断技术有限公司生产。PCT校准品浓度依次为0;0.50;1.75;6.00;20.00;50.00，对应吸光度值(OD)分别为0.0007;0.0058;0.0201;0.0532;0.1253;0.1589，采用6点定标绘制SPLINE定标曲线。

　　1.2 B组为瑞莱生物工程(深圳)有限公司生产的SSJ-2-2多功能免疫检测仪及配套试剂盒，检测上限50.00。

　　1.3 C组：将浓度50.00的校准品用0.9%的无菌生理盐水1:1倍比稀释，再用浓度20.00和50.00的校准品分别按照2:1;2:2;1:2;1:5的比例稀释，分别获得浓度为25.00;30.00;35.00;40.00;45.00的校准品, Au640检测对应吸光度值(OD)分别为: 0.1367;0.1498;0.1559;0.1582;0.1593。分析吸光度值及校准曲线，将最高浓度50.00换成稀释后35.00的校准品，在贝克曼Au5800全自动生化分析仪上标定，试剂及质控品同A，OD分别为：-0.0011;0.0034;0.0197;0.0447;0.1031;0.1469。

　　1.2一般资料：焦煤(集团)中央医院2017年9月1日-12月31日住院病人血清，无溶血、脂血及黄疸，以A结果分组:PCT>20.00及异常结果分别在B、C检测。>20.00标本41份(A1、B1、C1);仪器提示吸光度值报警符号(如：0.1612!)或浓度报警符号(D;﹫)的异常结果23份B2、C2和稀释5倍后Au640重新检测A2。

　　1.4统计学方法采用SPSS 17.0的统计学软件分析，结果用均数±标准差表示，组间比对t检验，以P<0.05为有显著性差异。

　　2结果

　　2.1 A1：25.53±3.52，B1：23.98±4.74，C1组：24.62±4.23，组与组之间结果均无显著性差异(P>0.05);A2：34.53±4.12，B2：36.98±3.74，C2组：27.33±2.54，A2和B2结果无明显差异(P>0.05)，C2与A2(P<0.05)、C2和B2(P<0.01)之间结果均有明显差异。

　　2.2 A组校准曲线中20.00与 50.00之间线性不佳，28.57- 35.71之间曲线上升缓慢，35.71后吸光度值变化不大曲线变得平坦， 检出最高值为31.62;B组检测最高值>50;C组无报警符号，校准品30.93和35.00间OD变化较小，最高检测值34.29。

　　2.3 分析A、C组校准曲线走向及OD值变化，综合两组的结果及生化反应曲线，将PCT的线性范围保守的界定为30.00，高于此浓度或结果出现异常报警符号的，应稀释重做。

　　3结论

　　胶乳增强免疫比浊法(LEIA)具有高特异性、高灵敏度的特点，仪器要求低，可在全自动生化分析仪上快速、准确的检测，较传统的放免、金标法PCT有很大优势[6-8]。但任何方法学都有它的短板，受抗体浓度及效价影响，有时难以准确的检测高值结果。这种现象很常见：如胱抑素-C(上海荣盛)和血浆D-D二聚体(北京利德曼)，校准曲线高值浓度OD值变化较小，线性范围均达不到校准品上限(Cys-C：8.00;D-D：20.80)，最高检出值Cys-C：4.67;D-D：10.03)。最简单的解决方法是稀释标本重做，但如何界定需不需要稀释，则需根据校准曲线判定。在对PCT结果的处理上，如果经验性的舍去最高浓度50.00直接五点定标，那么校准曲线最大范围仅仅界定为20.00，极大程度的降低了PCT的线性检测范围。翻阅文献[9-10]后更换宁波美康试剂，其校准品浓度依次为0;0.44;1.28;7.60;21.35，OD分别为-0.0450;0.0053;0.0197;0.1193;0.1884，POLYGONAL5点定标，LoB、LoD、LoQ及方法学均满足临床需求[9-10]，但校准曲线范围与万泰的5点定标差别不大。这种高浓度校准品浓度与吸光度值及校准曲线变化的不平行性，往往由于反应体系中没有过量的抗体存在，这种现象不是随机误差，通过再次定标是无法消除的。只能通过减低标本中的抗原反应量，使反应体系中抗体含量相对的变多，才能保障测试时抗体的过量，避免后带效应，得到理想的校准曲线。因此本研究采取稀释高值校准品，降低抗原反应量的方法，探究PCT的线性范围及检测上限。

　　严格来讲，校准品及标本的稀释应按照一定的文件规则和比例执行，稀释倍数过小或过大均会影响结果的准确性，不同浓度、不同项目最佳稀释比例也会有所不同[4,6]。本研究受校准物浓度所限，无法按等体积比例配置不同浓度的校准品，因此稀释后所得到的结果仅为相近结果，与真实结果尚有一定误差，但对结果的判定无本质上影响。LEIA为多点定标，每个浓度校准品的真实浓度以及试剂中抗体的浓度、效价及质量都会对校准曲线产生直接的影响，进而左右结果的准确性，因此试剂的选择尤为重要。不同厂家的试剂良莠不齐，即使同一种方法学不同试剂生产厂家质量差异也很大，同一个厂家的不同检测项目试剂质量也有优劣[1]。例如上面提到的胱抑素-C，更换北京利德曼和烟台澳邦后，情况并未改善，最后使用宁波美康检出上限达到7.63。因此当校准通过后，即使质控结果在控，也不能想当然认为结果一定没问题。质控监测的只是某个浓度范围的结果，不能囊括超出此浓度范围结果的准确性，应科学的分析吸光度值变化，特别是观察高浓度校准品的校准曲线变化，初步判断校准曲线线性范围的科学性。再通过日常工作中检测高、中、低浓度与临床相符程度以及高值标本稀释后的验证，方可确定校准曲线的真正线性范围和标本检出上限，确保检验结果的准确可靠。

　　参考文献：

　　[1]葛建军.胶乳增强免疫比浊法测定降钙素原方法学评价及临床意义[J].实用医技杂志, 2015, 22(8):853-854

　　[2]杨文杰，柯振符，黎舒，等.胶乳增强免疫透射比浊法检测降钙素原方法评价[J].广东医学院学报, 2015, 33(1):88-91

　　[3] 戴婉茹，周欢，林燕辉，等.免疫透射比浊法在AU5800全自动生化分析仪检测降钙素原的方法学评价[J].检验医学与临床, 2015, 12(10):1447-1448

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