实验中我们发现细胞膜上和细胞质中都有Gustducin免疫反应。细胞膜上的荧光强度较胞浆中的更强(图4)。味细胞荧光强度分布图表明膜上的荧光强度是大约是胞浆内的两倍，说明Gustducin主要存在细胞膜上。我们知道味物质主要通过刺激细胞膜上的受体及偶联G蛋白产生原初味觉信号，为什么细胞质中也会出现Gustducin免疫反应。笔者认为这可能是因为G蛋白的组装是在内质网中进行的，通过细胞质运送到细胞膜上，出现Gustducin免疫反应的地方正好是转运过程中的G蛋白。Mclaughlin(1992)指出在鼠味细胞中有多种类型的cDNA表示有多种剪接产物，因而一些α-Gustducin的转录物可能编码C端截尾蛋白，这些蛋白就不能与味受体蛋白相互联系，所以这些产物就分散在味细胞的细胞质中了。我们实验里兔味细胞胞浆中出现的Gustducin免疫反应支持这种说法[6]。

　　激光共聚焦显微镜可排除非焦平面的荧光干扰，具有成像清晰、图象对比度高的优点，并可进行细胞的非侵入式光学断层扫描，利用计算机进行细胞结构的三维重建，故又称为“细胞CT”。激光共聚焦显微镜已被广泛应用于细胞生物学、病理学和遗传学等各个领域，可对细胞的结构、分子、离子等进行实时动态检测。用于激光共聚焦显微镜检测的生物样本必须粘附固定。培养细胞由于贴壁生长，无须使用粘附剂，可直接进行荧光染色，但组织细胞则必须先使用粘附剂固定，方可用于激光共聚焦显微镜观察。本实验中应用了一种简便的多聚赖氨酸粘附固定法，将味蕾细胞悬液粘附于盖玻片上，直接进行免疫荧光染色，方法简单、固定牢靠，细胞成像清晰。近年来，由于包埋-去包埋剂电子显微镜技术的发展，对味蕾细胞超微结构的研究取得了很大进展[7]，但电子显微镜制样技术繁琐，且无法进行定量测定。激光共聚焦显微镜制样简便，操作简单，且可直接测定荧光值，是一种相对较为简单可对细胞内物质进行定性、定量测定的方法。 参考文献(References)[1] Kinnamon SC.Taste transduction. A bitter-sweet beginning. Nature,1996,381:737-738.

　　[2] El-sharaby,A.,Ueda,K.,Kurisu,K.,et al.Development and maturation of taste buds of the palatal epithelium of the rat:histological and immunohistochemical study[J].The Anatomical Record,2001,263:260-268.

　　[3] Weihong Lin,Thomas E.Finger,Bernaro C.Rossier,et al.Epithelial Na+ channel subunits in rat taste cells:localization and regulation by aldosterone[J].The Journal of Comparative Neurology,1999,405:406-420.

　　[4] Zhou LH, Liu XM, Feng XH,et al. Expression of alpha-gustducin in the circumvallate papillae of taste buds of diabetic rats. [J]. Acta Histochem. 2009;111(2):145-149.

　　[5] SHIMA Zhengqinag,WU Junzheng.Cell culture[M].Xi′an ：World Book Press.2001.(In Chinese)

　　[6] Collin J. Ruiz. Maintenance of rat taste buds in primary culture [J]. Chemical senses. 2001, 26: 861-873.

　　[7] Narukawa M, Kitagawa-Iseki K, Oike H.Characterization of umami receptor and coupling G protein in mouse taste cells.Neuroreport. 2008 Aug 6;19(12):1169-73.

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