2.4 β-葡萄糖醛酸酶的提取

　　2.4.1 提取原理

　　实验提取β-G的工艺是利用硫酸铵对蛋白质的沉淀作用。提取过程中使用2次硫酸铵，首先使用饱和硫酸铵沉淀蛋白，然后采用30～45%饱和度的硫酸铵分组沉淀;从培养液中分离菌体时，采用转速3000rpm,15min;沉淀的溶解使用少量的1/15mol/L pH8.0 PBS磷酸盐缓冲液;在4℃下透析脱盐获得纯品。

　　2.4.2 β-G提取回收率与提纯倍数

　　β-G为可溶性蛋白，所以测定蛋白的方法选用考马斯亮蓝G-250法，提取纯化的回收率与提纯倍数测定结果见表1。

　　表1 β-G提取纯化

　　Table 1 β-G extraction and purification

　　指 标

　　总蛋白(mg)

　　总活力(U)

　　比活力(U/mg)

　　提纯倍数

　　回收率(%)

　　提取前

　　提取后

　　2316

　　1324

　　0.57

　　1

　　100

　　370

　　680

　　1.84

　　3.2

　　51.3

　　3 结论

　　3.1最佳发酵培养基：胰蛋白胨 1%、淀粉 5%、Nacl 0.5%、酵母膏 0.5%、pH 7.2～7.4;

　　3.2 最佳发酵培养条件：发酵培养基的装液量为50ml/250ml三角瓶，110rpm振荡培养;

　　3.3采用硫酸铵对β-G进行粗提，提纯倍数3.2，回收率51.3%。

　　参考文献：

　　[1]聂凌鸿.微生物污染与食品安全[J],四川食品与发酵,2003,(2):52-55.

　　[2]徐茂军.基因探针技术及其在食品卫生检测中的应用[J].食品与发酵工业，2000，(2)：66-70.

　　[3]孙家莉,王文彤.酶-底物PNP-Glucu Na的合成及快速检测的应用[J].化学通报,2000，(3):45- 48.

　　[4]孙家莉.对-硝基苯葡糖苷酸钠纸片法快速检测大肠埃希菌.中国检验医学杂志，2001，(3):168-170.

　　[5]潘宝海.对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖法测定饲用α-半乳糖苷酶活力的方法[J].中国农业大学学报，2002，(5):107-111.

 2/2   首页 上一页 1 2