择204nm为检测波长。

　　图2. 某品牌化妆水样品前处理实验现象对比

　　a称取0.5~1g化妆水样品于50ml旋盖离心管中，加入10ml饱和食盐水，充分振荡后超声提取，再加入10ml石油醚，用力振摇使两相充分混合，加入5滴正辛醇，轻轻摇匀后静置至少1min，置于离心机中以7500r/min高速离心1min，取上层清液，过0.45μm滤膜过滤后供分析使用;b 与a同样的步骤，但没有加入正辛醇。

　　Fig2.Comparison of experimental phenomenon of a lotion pre-treatment

　　a 0.5~1g sample of a cosmetic product was taken in a 50 ml centrifuge tube. The ingredient was extracted in a 10 ml petroleum ether by shaking it well after adding 10ml of saturate salt solution phase, then adding 5 drops of n-octanol. after brief shaking and standing at least 1 min, this mixture was centrifuged at 7500 rpm for 1 min. Approx. 2 ml of the suppernant were passed through a 0.45μm syringe filter; b The same as a, except adding n-octanol.

　　图3. IPBC标准溶液全扫描波长的光谱图

　　Fig3. Spectrogram of IPBC standard solution 流动相组成及配比的确定 在其他条件相同的情况下，对甲醇-水和乙腈-水这两种流动相进行比较，实验表明，甲醇因为本身有紫外吸收，会让噪音增大，一般不适合用于低波长(低于210nm)的检测条件，因此选定乙腈-水体系。

　　以化妆品中的杂质与标准样品的分离度为依据，考察不同配比的乙腈和水，实验结果表明流动相比例为V(乙腈):V(水)=55:45时分离度最佳。所选流动相，不仅具有较好的分离度、分析时间段(仅需10min)，且基线平、灵敏度高、定量好。 柱温及流动相流速的确定 实验结果表明，柱温为25～40℃时分离效果都很好，本方法采用的柱温为30℃。兼顾时间、柱压和分离效果，最佳流速选择为1.0ml/min。 IPBC对紫外线的敏感性 文献[16]中报道，IPBC对紫外线敏感，由于化妆品平时使用时可能受阳光光照影响，本文使用同一时间段的阳光对IPBC标液进行不同时长照射，进行色谱分析，得到表2数据。

　　表2. IPBC紫外线照射影响研究

　　Table2. Study of the influence of UV irradiation on IPBC 同一时间段阳光

　　照射时长 相对峰面积比a 5min 98 10min 98 15min 95 25min 93 45min 86 1h 86 3h 83 4h 82 5h 82 注：进行试验的IPBC浓度为0.05mg/ml

　　aIPBC给定时间阳光照射后得到色谱峰面积比上最初没有进行照射色谱峰面积(色谱图来自HPLC分析)

　　Note.Initial concentration of IPBC was 0.05mg/ml

　　aPeak area (%) (from HPLC-DAD analysis) after given irradiation time vs that for the initial,non-irradiated IPBC

　　从表2中可以看出，IPBC峰面积受阳光照射减小不是很显著，但为避免引起实验误差，IPBC标液配制好应该储存在没有阳光直射的地方，防止其分解。 方法的线性关系与检出限 准确称取IPBC标准品0.0500g，置于100ml溶量瓶中，流动相溶解，并稀释至刻度，配置成0.5mg/ml的IPBC标准储备液。移取上述标准储备液适量，配置成质量浓度分别为：0.001mg/ml、0.002mg/ml、0.005mg/ml、0.020mg/ml、0.050mg/ml的标准系列。在上述色谱条件下测定IPBC标准系列溶液，标准溶液色谱图见图4。

　　图4. IPBC标准溶液色谱图

　　Fig4.Chromatograms of IPBC standard solution

　　以IPBC质量浓度(x，mg/ml)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标作图，IPBC标准溶液的工作曲线见图5，其线性方程和相关系数分别为y=8.47×103x-0.30和R=0.999 9。

　　图5. IPBC标准溶液的工作曲线

　　Fig5. Working curve of IPBC standard solution

　　由图5可见，IPBC质量浓度在0.001mg/ml～0.050mg/ml范围内与峰面积具有良好的线性关系。在上述条件下，以仪器S/N=3计算，IPBC的仪器最低检出限为3.46×10-6mg/ml。由样品前处理最低的回收率和浓缩倍数关系确定方法的检出限为6.92×10-2mg/kg。 精密度与回收率实验 向0.5g四类型8种化妆品空白样品中分别加入质量浓度为0.5mg/mL的IPBC标准溶液0.5ml、1ml、1.5ml，按上述方法检测各进行2次平行实验，考察方法的回收率和精密度，结果见表3。从表3中可以看出，该方法的平均回收率为109%~85%，相对标准偏差为0.62%~4.93%。 实际样品检测结果 选取10个不同种类的化妆品样品，均匀溶解于饱和食盐水中，直接用石油醚萃取，萃取液经0.45μm滤膜过滤后，HPLC-DAD分析，采用外标法定量。所检化妆品样品中，有5个化妆品样品检出IPBC，其含量为0.01～0.02%，均低于化妆品卫生规范中最大限用量0.05%。实际样品的色谱图见图6。

　　图6. 含防腐剂IPBC实际样品检测色谱图(a为某品牌眼凝胶b为某品牌调理精华液)

　　Fig6. Chromatograms of cosmetic sample(a Eye gel, b Essence) 结论 对比已有的IPBC检测方法，由于IPBC作为复配防腐剂在化妆品中的加入量极少(<<0.05%)，单纯用甲醇超声提取进行样品前处理后，使用文献中的仪器检测方法或本文中的仪器检测方法，无法满足IPBC最低检出浓度。本文中样品前处理方法，操作步骤少、快捷、方便，最重要的是能满足日常含有极少IPBC化妆品的检测，能够检出浓度足够低的IPBC，且有效避免化妆品基质等其他杂质干扰，降低化妆品成分可能堵塞色谱柱的风险，有效地保护了色谱柱。 Table2.The average recoveries and RSDs of blank samples spiked standards that about 4 types include 8 kinds of cosmetics at three concentration levels

　　表2 四类型8种化妆品样品防腐剂IPBC的添加浓度、平均回收率、相对标准偏差 样品 加标(mg) 平均回收率R/% RSD St/% 膏霜1 0.25 0.5 0.75 103 99 96 4.83 2.15 1.47 膏霜2 102 93 90 0.70 1.52 1.57 护发素1 0.25 0.5 0.75 89 94 91 1.59 2.27 0.78 护发素2 82 83 88 0.87 4.29 0.81 香波1 0.25 0.5 0.75 88 86 86 0.81 4.93 2.48 香波2 87 88 85 0.62 0.81 3.33 化妆水1 0.25 0.5 0.75 106 99 97 2.01 2.86 0.73 化妆水2 109 103 101 2.59 2.75 2.11

　　参考文献：

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　　[5]中华人民共和国卫生部.化妆品卫生规范(2007)[S].北京:中国标准出版社.2007.

　　[6] Council Directive 76/768/EC of 27th July on the approximation of the laws of Member States relating to cosmetic products[C]. official Journal of the European Communities,1976. L262, 169.

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