摘要：以油棕幼胚为外植体，以N6培养基上添加不同浓度的生长素与细胞分裂素进行愈伤组织诱导研究，结果表明，无激素的培养基上不能诱导出愈伤组织，单独加入2.4-D、IAA IBA、6-BA中N6+2.4-D110mg/L的浓度愈伤组织形成率最高，为83.75%，诱导过程中褐化现象少。N6+2.4D110mg/L+PVP5g/L+蔗糖6%+AC0.3%培养基促进愈伤组织的诱导和生长，适合进一步继代培养。

　　关键词：外源激素 油棕 愈伤组织 诱导

　　油棕(Elaeisguineensis Jacq.)属棕榈科(Palmae)多年生乔木，是热带地区重要的木本油料作物[1]，原产地在南纬10°-北纬15°、海拔150m以下的非洲潮湿森林边缘地区。油棕树浑身是宝，油棕产品的用途广泛，经济价值高。从果实到树干，从果壳到果柄，从复叶到油棕核壳，都能加工成各种产品，棕榈油的产量和国际贸易已超过大豆油与菜籽油，成为全世界最主要的植物油[2]。我国现有油棕栽培面积约0.37万公顷，主要分布在海南、两广南部、台湾南部、云南南部等地区，其种植面积和棕榈油的产量都比以前有较大幅度的增长。随着油棕种植面积的扩大，油棕的种苗的需求显得尤为重要。本文研究了几种外源激素对油棕愈上组织形成的影响，期望为油棕的快速繁殖提供科学指导。

　　1材料与方法

　　1.1 试验材料

　　试验材料为采自中国热带农业科学院椰子研究所的油棕基地油棕(Elaeisguineensis Jacq.)果实。

　　1.2外植体灭菌

　　取种果在室内用自来水洗净后除去果肉，切开种核取出带胚的胚乳块，于超净台上将胚乳块浸于70%酒精溶液中1min，无菌水洗1-2次，然后置于0.15%的HgCL2溶液中消毒20min，无菌水洗3次，用镊子和解剖刀从胚乳块中切取胚，置于预培养基中[3-6]。

　　1.3 培养条件

　　以N6为基本培养基添加不同浓度组合的植物生长调节剂诱导，培养基中均加入卡拉胶4g/L、蔗糖30g/L、PVP 5g/L，调节pH为5.8。接种后30d暗培养，培养温度为28±1℃。

　　培养温度为(28+1℃)，培养前30d暗室培养。

　　1.4 培养基的设计

　　本试验设有10种培养基：(1)N6+2.4-D(20mg/l);(2)N6+2.4-D(50mg/l);(3)N6+2.4-D(80mg/l);(4)N6+2.4-D(110mg/l);(5)N6+2.4-D(140mg/l);(6)N6+IAA(80mg/l);(7)N6+IAA(110mg/l);(8)N6+IAA(140mg/l);(9) N6+IBA(110mg/l);(10) N6+6-BA(110mg/l)。

　　2 结果与分析

　　2.1 外源激素对诱导愈伤组织的影响

　　种胚接种暗培养30-45d后，(1)～(8)号的培养基有愈伤组织出现，45-60d后，愈伤组织呈珍珠白色或淡黄色，吸器膨大，较紧密，成海棉团状增多，而(6)～(8)的培养基中愈伤组织相比(1)～(5)变化不明显，(9)、(10)的培养基中一直没有任何反应。实验结果表明(6)、(7)、(8)的出愈率相对较低;(9)、(10)激素的添加对油棕愈伤组织的形成影响不大。

　　2.2 2.4-D激素的添加对诱导愈伤组织的影响

　　培养基配方正确与否直接影响着外植体的分化与生长，特别是各种激素的调配，在组织培养中尤为关键，从表1我们可看出，2.4-D浓度在50-110mg/l的范围内，随着浓度的增加，出愈率不断增加，当2.4-D浓度达到140mg/l时，出愈率大幅下降，对愈伤组织生长起阻碍作用。

　　表1不同浓度2,4-D对油棕愈伤组织诱导的影响 2,4-D浓度(mg/L) 接种外植体数 褐化数 愈伤组织快数 出愈率(%) 生长情况 140 60 8 4 7.14 -- 110 60 13 50.25 83.75 ++ 80 60 5 45 81.00 +- 50 60 2 0 0.00 - 20 60 3 0 0.00 -　 注：--诱导效果差，生长势差;++诱导效果好，生长势好;+-诱导效果好，生长势一般;-诱导效果差;

　　N6+2.4-D培养基中愈伤组织 N6+2.4-D培养基中愈伤组织发芽

　　2.3 外植体的选择对诱导愈伤组织的影响

　　油棕快繁在马来西亚，印度尼西亚，泰国等国家采用冠部队幼叶组织作为外植体，从生长点以上切下顶部，除去20-30cm的 叶片，从从冠部上10cm的组织内可获得分生的叶基组织。由于分生组织深埋于木本的螺旋状叶的基部，只要除去外部组织就可获得无菌材料，但叶片因组织高度分化容易褐化[4]，选择适宜的外植体是植物组织培养的关键因素之一，本实验取开花期后6-12周采集的大小基本一致、皮半红色，未发育到硬核期种果的幼胚[5]。Bonga认为外植体越小，切面与体积的比率越大,伤害及褐变的程度就越小。在卡德兰新茎的培养中也有类似的结果 [6]。我们的实验结果表明未成熟幼胚在不同激素培养中很少出现褐化现象。

　　2.4 光照对诱导愈伤组织的影响

　　褐化与光照存在一定的关系，褐化是植物体内的酚类物质合成转化为醌类物质的结果，光能促进多种组织培养中的酚氧化[7，8]，在黑暗中培养能减轻褐化，鉴于此，我们把材料置于暗室28℃培养，结果发现，在培养过程中褐化现象很小，说明幼胚中的酚类物质含量不高，不会影响其生长发育。

　　3结论

　　以油棕种果幼胚为外植体，能诱导出愈伤组织，诱导的整个过程中较少出现褐化现象，N6+2.4-D110mg/L的愈伤组织形成率最高。IAA、IBA、6-BA不同浓度的添加对油棕愈伤组织的出现没形成影响，可能与浓度太高有关，建议下一步的实验将针对这些问题做更深入的研究.

　　参考文献

　　1]王开玺，杨创平，罗石荣等.海南岛油棕种质资源考察报告[J].海南物(植物)种质资源考察文集.北京:农业出版社,1992:99~104.

　　[2]熊惠波，李 瑞，马子龙.油棕产业调查分析及中国发展油棕产业的建议[J].中国农学通报 2009,25(24):114~117

　　[3]王蒂.植物组织培养实验指导[M].中国农业出版社.2008:10~11

　　[4]周俊辉、周家容、曾浩森等.园艺植物组织培养中的褐化现象及抗褐化研究进展[J].2000：481~486

　　[5] 陈正华主编 木本植物组织培养[M].高等教育出板社.1986

　　[6] Ruslan Abdullah, Alizah Zainal ,Wee Yew Heng, Immature embryo: A useful tool for oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) genetic transformation studies[J]2005(15): 25~34

　　[7]谭文糟，戴策刚主编观赏植物组织培养技术[M].中国林业出版社，1991 238~240

　　[8] Marks T R，simposn s E.Reduce pbenoljc oxjdaljon at cullure jnitiation in Vitro following the exposure of field—grown stock plants to darkness or low level of irradiance[J] Hort Sci，1990，65:103～111.

　　基金项目：中国热带农业科学院橡胶研究所基本科研业务费专项资金项目。(YWFZX09-11(N)

　　作者简介：沈雁(1980-)，女，主要从事棕榈科植物遗传育种研究。Email：yanshen246@sina.com